BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG):高特异性小鼠IgG检测与人源背景排除的核心工具
在生物医药研发和基础科研领域,小鼠是最常用的实验动物和抗体生产宿主。羊抗小鼠IgG是检测小鼠源抗体的经典二抗。然而,在涉及人鼠双物种的实验体系中(如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、混合样本检测、人组织上的小鼠一抗染色等),普通抗小鼠IgG二抗可能与人IgG发生交叉反应,导致假阳性结果。本产品为经过交叉吸附处理的山羊抗小鼠IgG(H+L),不识别人IgG,是人鼠双物种实验体系中高特异性小鼠IgG检测的理想选择。生物素标记进一步结合了生物素-亲和素信号放大系统,可显著提高检测灵敏度。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG)(生物素标记) |
| 宿主来源 | 山羊 |
| 特异性 | 识别小鼠IgG的重链和轻链(H+L),经交叉吸附处理,不识别人IgG |
| 标记物 | 生物素(Biotin) |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%GSA、N防腐剂(CMIT/MIT/THYMOL) |
| 保存条件 | -20℃(避光) |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 流式细胞术/IF/IP | 1:200-2000 |
| IHC | 1:500-2500 |
| ELISA/Western Blot | 1:2000-20000 |
| 识别范围 | 小鼠IgG重链和轻链(H+L) |
| 交叉反应 | 经吸附处理,不识别人IgG |
| 信号放大系统 | 配合HRP/荧光标记的链霉亲和素使用 |
三、产品特点
-
高特异性——不交叉人IgG
经过严格的交叉吸附处理,本产品不识别人IgG,确保在人-小鼠双物种实验体系中无假阳性信号。 -
生物素标记——信号放大能力强
生物素-亲和素系统可将信号放大数十倍至上百倍。 -
H+L特异性——双重识别
识别IgG的重链和轻链,灵敏度更高。 -
多平台兼容
适用于ELISA、Western Blot、流式细胞术、IHC、IF、IP等多种检测平台。
四、交叉吸附的意义
| 特性 | 说明 |
|---|---|
| 标准抗小鼠IgG | 可能识别人IgG(存在种属交叉反应) |
| 本产品 | 经过人IgG亲和吸附柱处理,去除了与人IgG交叉反应的抗体 |
| 适用场景 | 人-小鼠双物种实验体系,如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、人组织上的小鼠一抗检测 |
| 优势 | 避免假阳性,结果更可靠 |
五、主要应用场景
1. 人-小鼠双物种体系中的小鼠IgG检测(核心应用)
典型场景:
- 人源化小鼠模型:人源化小鼠体内同时存在人和小鼠IgG
- 人血清中的小鼠抗体检测:人血清样本中含有内源性人IgG
- 人组织/细胞上的小鼠一抗检测(IHC/IF)
- 混合样本中特异性检测小鼠IgG
- 人IgG存在下的ELISA/Western Blot
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被特异性抗原 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入含小鼠抗体和人IgG的混合样品 |
| 4 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG) |
| 5 | 加入HRP-链霉亲和素 |
| 6 | 加TMB显色 |
2. 常规ELISA检测(配合HRP-链霉亲和素)
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被特异性抗原 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠血清或小鼠源一抗 |
| 4 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:2000-20000稀释) |
| 5 | 加入HRP-链霉亲和素 |
| 6 | 加TMB显色 |
3. Western Blot检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | SDS-PAGE电泳、转膜 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠源一抗 |
| 4 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:2000-20000稀释) |
| 5 | 加入HRP-链霉亲和素 |
| 6 | ECL化学发光检测 |
4. 免疫组化(IHC)与免疫荧光(IF)(人组织)
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 人组织切片/细胞固定、抗原修复 |
| 2 | 封闭(使用与二抗同源的血清,如山羊血清) |
| 3 | 加入小鼠源一抗 |
| 4 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(IHC:1:500-2500; IF:1:200-2000) |
| 5 | 加入HRP-链霉亲和素(IHC)或荧光-链霉亲和素(IF) |
| 6 | 显色或荧光观察 |
5. 流式细胞术(配合荧光-链霉亲和素)
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 人源细胞固定、透化(如需胞内染色) |
| 2 | 加入小鼠源一抗 |
| 3 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:200-2000稀释) |
| 4 | 加入荧光标记的链霉亲和素(如SA-FITC、SA-PE) |
| 5 | 流式细胞仪检测 |
六、实验操作要点
1. ELISA方案(使用本产品)
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 包被特异性抗原 | 4℃过夜 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或脱脂奶粉 |
| 3 | 加入小鼠血清或小鼠源一抗 | 室温孵育1-2小时 |
| 4 | 洗涤 | 3-5次 |
| 5 | 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L) | 1:2000-20000稀释,室温1小时 |
| 6 | 洗涤 | 3-5次 |
| 7 | 加入HRP-链霉亲和素 | 按说明书稀释,室温30分钟 |
| 8 | 洗涤 | 3-5次 |
| 9 | 加TMB显色 | 15-20分钟 |
| 10 | 终止读数 | 450nm |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| ELISA/WB | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:200-1:2000 |
| IHC | 1:1000 | 1:500-1:2500 |
| IF | 1:500 | 1:200-1:2000 |
| IP | 1:500 | 1:200-1:2000 |
3. 对照设置(关键!验证交叉吸附效果)
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 小鼠IgG阳性对照 | 小鼠IgG包被或小鼠源一抗 | 验证检测体系正常工作 |
| 人IgG阴性对照 | 人IgG包被或人源一抗 | 验证不交叉—应无显著信号 |
| 空白对照 | 无一抗 | 评估本底 |
| 链霉亲和素对照 | 不加生物素化抗体,只加链霉亲和素 | 评估链霉亲和素非特异性结合 |
重要:实验时应同时设置人IgG阴性对照,确认无交叉反应。
4. 重要操作提示
- 本产品最大的特点是不识别人IgG,适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清样本检测、人组织IHC/IF等)。
- 本产品为生物素标记抗体,必须与链霉亲和素(SA)检测系统配合使用,不可直接显色。
- H+L特异性意味着抗体识别IgG的重链和轻链,灵敏度更高。
- 小鼠有多个IgG亚类(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG2c),本产品为总IgG检测,可识别所有亚类。
- 生物素-亲和素系统可显著放大信号,适用于低丰度靶标检测。
- 某些组织(肝、肾)含内源性生物素,可能产生高背景,建议使用生物素封闭试剂盒。
- 请使用正确的稀释液,没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验,否则可能得到错误结果。
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融,建议适当分装后使用 |
| 有效期 | 以产品标签为准;有效期过后很长一段时间仍可使用,但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用,以免污染和失效 |
八、常见问题
Q1:BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG)的主要用途是什么?
A1:主要用于ELISA、Western Blot、IHC、IF等实验中小鼠IgG的特异性检测,特别适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、人组织上的小鼠一抗染色等),避免人IgG的交叉反应干扰。
Q2:“不交叉人IgG”是什么意思?如何验证?
A2:指本产品经过人IgG亲和吸附柱处理,去除了与人IgG交叉反应的抗体。验证方法:以人IgG包被ELISA板,使用本产品检测,应无显著显色信号。
Q3:什么情况下需要使用本产品?
A3:
| 实验场景 | 推荐产品 |
|---|---|
| 单纯小鼠样本(无人IgG) | 普通抗小鼠IgG即可 |
| 人与小鼠混合样本 | 本产品(不交叉) |
| 人源化小鼠模型相关实验 | 本产品(不交叉) |
| 人血清/血浆中检测小鼠抗体 | 本产品(不交叉) |
| 人组织上检测小鼠一抗(IHC) | 本产品(不交叉) |
Q4:H+L特异性与Fc特异性有什么区别?
A4:
| 特性 | H+L特异性 | Fc特异性 |
|---|---|---|
| 识别区域 | 重链+轻链 | 仅Fc片段 |
| 灵敏度 | 更高 | 中等 |
| 适用场景 | 常规检测、WB(可检测还原后的重轻链) | 特定实验 |
推荐:常规检测优先选择H+L特异性,灵敏度更高。
Q5:如何确定最佳稀释度?
A5:建议通过预实验进行滴定:将抗体从1:500开始倍比稀释至1:40000,选择信噪比最高的稀释度。
Q6:产品如何保存?
A6:请存放于-20℃,避免反复冻融,建议分装保存。有效期以产品标签为准。
Q7:本产品的缓冲液中使用GSA而不是BSA,有什么区别?
A7:GSA(山羊血清白蛋白)作为稳定剂,与山羊源抗体同源,在某些特定检测体系中可进一步降低背景干扰。
本产品为生物素标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体,经交叉吸附处理,不识别人IgG,已通过多家客户验证,灵敏度高、特异性好、背景低,特别适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清检测、人组织IHC/IF等)。如需详细技术参数或样品测试,请与我们联系。
(注:本产品仅用于科学研究,不用于临床诊断。)
