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BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG):高特异性小鼠IgG检测与人源背景排除的核心工具

发布时间:2026-05-06 点击数:61

在生物医药研发和基础科研领域,小鼠是最常用的实验动物和抗体生产宿主。羊抗小鼠IgG是检测小鼠源抗体的经典二抗。然而,在涉及人鼠双物种的实验体系中(如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、混合样本检测、人组织上的小鼠一抗染色等),普通抗小鼠IgG二抗可能与人IgG发生交叉反应,导致假阳性结果。本产品为经过交叉吸附处理的山羊抗小鼠IgG(H+L),不识别人IgG,是人鼠双物种实验体系中高特异性小鼠IgG检测的理想选择。生物素标记进一步结合了生物素-亲和素信号放大系统,可显著提高检测灵敏度。

一、产品概述

项目 参数
产品名称 BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG)(生物素标记)
宿主来源 山羊
特异性 识别小鼠IgG的重链和轻链(H+L),经交叉吸附处理,不识别人IgG
标记物 生物素(Biotin)
浓度 以抗体计1mg/mL左右
缓冲液成分 50%甘油、0.01M PBS、0.5%GSA、N防腐剂(CMIT/MIT/THYMOL)
保存条件 -20℃(避光)
有效期 以产品标签为准

二、核心性能

性能指标 参数
流式细胞术/IF/IP 1:200-2000
IHC 1:500-2500
ELISA/Western Blot 1:2000-20000
识别范围 小鼠IgG重链和轻链(H+L)
交叉反应 经吸附处理,不识别人IgG
信号放大系统 配合HRP/荧光标记的链霉亲和素使用

三、产品特点

  1. 高特异性——不交叉人IgG
    经过严格的交叉吸附处理,本产品不识别人IgG,确保在人-小鼠双物种实验体系中无假阳性信号。

  2. 生物素标记——信号放大能力强
    生物素-亲和素系统可将信号放大数十倍至上百倍。

  3. H+L特异性——双重识别
    识别IgG的重链和轻链,灵敏度更高。

  4. 多平台兼容
    适用于ELISA、Western Blot、流式细胞术、IHC、IF、IP等多种检测平台。

四、交叉吸附的意义

特性 说明
标准抗小鼠IgG 可能识别IgG(存在种属交叉反应)
本产品 经过IgG亲和吸附柱处理,去除了与IgG交叉反应的抗体
适用场景 -小鼠双物种实验体系,如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、人组织上的小鼠一抗检测
优势 避免假阳性,结果更可靠

五、主要应用场景

1. 人-小鼠双物种体系中的小鼠IgG检测(核心应用)

典型场景

  • 人源化小鼠模型:人源化小鼠体内同时存在人和小鼠IgG
  • 人血清中的小鼠抗体检测:人血清样本中含有内源性人IgG
  • 人组织/细胞上的小鼠一抗检测(IHC/IF)
  • 混合样本中特异性检测小鼠IgG
  • 人IgG存在下的ELISA/Western Blot
步骤 操作
1 包被特异性抗原
2 封闭
3 加入含小鼠抗体和IgG的混合样品
4 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉IgG)
5 加入HRP-链霉亲和素
6 加TMB显色

2. 常规ELISA检测(配合HRP-链霉亲和素)

步骤 操作
1 包被特异性抗原
2 封闭
3 加入小鼠血清或小鼠源一抗
4 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:2000-20000稀释)
5 加入HRP-链霉亲和素
6 加TMB显色

3. Western Blot检测

步骤 操作
1 SDS-PAGE电泳、转膜
2 封闭
3 加入小鼠源一抗
4 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:2000-20000稀释)
5 加入HRP-链霉亲和素
6 ECL化学发光检测

4. 免疫组化(IHC)与免疫荧光(IF)(人组织)

步骤 操作
1 组织切片/细胞固定、抗原修复
2 封闭(使用与二抗同源的血清,如山羊血清)
3 加入小鼠源一抗
4 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(IHC:1:500-2500; IF:1:200-2000)
5 加入HRP-链霉亲和素(IHC)或荧光-链霉亲和素(IF)
6 显色或荧光观察

5. 流式细胞术(配合荧光-链霉亲和素)

步骤 操作
1 人源细胞固定、透化(如需胞内染色)
2 加入小鼠源一抗
3 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(1:200-2000稀释)
4 加入荧光标记的链霉亲和素(如SA-FITC、SA-PE)
5 流式细胞仪检测

六、实验操作要点

1. ELISA方案(使用本产品)

步骤 操作 说明
1 包被特异性抗原 4℃过夜
2 封闭 含BSA或脱脂奶粉
3 加入小鼠血清或小鼠源一抗 室温孵育1-2小时
4 洗涤 3-5次
5 加入BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L) 1:2000-20000稀释,室温1小时
6 洗涤 3-5次
7 加入HRP-链霉亲和素 按说明书稀释,室温30分钟
8 洗涤 3-5次
9 加TMB显色 15-20分钟
10 终止读数 450nm

2. 稀释度选择建议

实验类型 建议起始稀释度 优化范围
ELISA/WB 1:5000 1:2000-1:20000
流式细胞术 1:500 1:200-1:2000
IHC 1:1000 1:500-1:2500
IF 1:500 1:200-1:2000
IP 1:500 1:200-1:2000

3. 对照设置(关键!验证交叉吸附效果)

对照类型 组成 目的
小鼠IgG阳性对照 小鼠IgG包被或小鼠源一抗 验证检测体系正常工作
IgG阴性对照 IgG包被或源一抗 验证不交叉—应无显著信号
空白对照 无一抗 评估本底
链霉亲和素对照 不加生物素化抗体,只加链霉亲和素 评估链霉亲和素非特异性结合

重要:实验时应同时设置IgG阴性对照,确认无交叉反应。

4. 重要操作提示

  • 本产品最大的特点是不识别人IgG,适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清样本检测、人组织IHC/IF等)。
  • 本产品为生物素标记抗体,必须与链霉亲和素(SA)检测系统配合使用,不可直接显色。
  • H+L特异性意味着抗体识别IgG的重链和轻链,灵敏度更高。
  • 小鼠有多个IgG亚类(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgG2c),本产品为总IgG检测,可识别所有亚类。
  • 生物素-亲和素系统可显著放大信号,适用于低丰度靶标检测。
  • 某些组织(肝、肾)含内源性生物素,可能产生高背景,建议使用生物素封闭试剂盒。
  • 请使用正确的稀释液,没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验,否则可能得到错误结果。

七、保存与使用注意事项

项目 说明
保存条件 -20℃避光保存
分装建议 避免反复冻融,建议适当分装后使用
有效期 以产品标签为准;有效期过后很长一段时间仍可使用,但仍建议在有效期内使用
环境要求 请不要在脏乱和强光环境中取用,以免污染和失效

八、常见问题

Q1:BIOTIN-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉人IgG)的主要用途是什么?
A1:主要用于ELISA、Western Blot、IHC、IF等实验中小鼠IgG的特异性检测,特别适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清中的小鼠抗体检测、人组织上的小鼠一抗染色等),避免人IgG的交叉反应干扰。

Q2:“不交叉人IgG”是什么意思?如何验证?
A2:指本产品经过IgG亲和吸附柱处理,去除了与IgG交叉反应的抗体。验证方法:以IgG包被ELISA板,使用本产品检测,应无显著显色信号。

Q3:什么情况下需要使用本产品?
A3:

实验场景 推荐产品
单纯小鼠样本(无人IgG) 普通抗小鼠IgG即可
与小鼠混合样本 本产品(不交叉)
人源化小鼠模型相关实验 本产品(不交叉)
血清/血浆中检测小鼠抗体 本产品(不交叉)
组织上检测小鼠一抗(IHC) 本产品(不交叉)

Q4:H+L特异性与Fc特异性有什么区别?
A4:

特性 H+L特异性 Fc特异性
识别区域 重链+轻链 仅Fc片段
灵敏度 更高 中等
适用场景 常规检测、WB(可检测还原后的重轻链) 特定实验

推荐:常规检测优先选择H+L特异性,灵敏度更高。

Q5:如何确定最佳稀释度?
A5:建议通过预实验进行滴定:将抗体从1:500开始倍比稀释至1:40000,选择信噪比最高的稀释度。

Q6:产品如何保存?
A6:请存放于-20℃,避免反复冻融,建议分装保存。有效期以产品标签为准。

Q7:本产品的缓冲液中使用GSA而不是BSA,有什么区别?
A7:GSA(山羊血清白蛋白)作为稳定剂,与山羊源抗体同源,在某些特定检测体系中可进一步降低背景干扰。


本产品为生物素标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体,经交叉吸附处理,不识别人IgG,已通过多家客户验证,灵敏度高、特异性好、背景低,特别适用于人-小鼠双物种实验体系(如人源化小鼠模型、人血清检测、人组织IHC/IF等)。如需详细技术参数或样品测试,请与我们联系。

(注:本产品仅用于科学研究,不用于临床诊断。)



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