HRP-SPG：广谱物种IgG检测的高效通用酶标工具
在免疫检测和生物医药研发领域，蛋白G是一种源自G型链球菌的细菌细胞壁蛋白，能够特异性结合多种哺乳动物IgG的Fc片段。与蛋白A相比，蛋白G具有更广的物种谱和更强的结合能力。HRP标记的重组蛋白G（HRP-SPG）将酶标记技术与广谱IgG结合蛋白相结合，成为一种通用的二抗替代工具，可同时检测多个物种的IgG，极大简化实验操作。
今天，我们以HRP-SPG为例，为您解析这类产品在ELISA、Western Blot等实验中的广泛应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | HRP-SPG（辣根过氧化物酶标记重组蛋白G） |
| 来源 | 重组蛋白G（Streptococcal Protein G） |
| 标记物 | HRP（辣根过氧化物酶） |
| 浓度 | 2mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、Proclin-300 |
| 保存条件 | -20℃（避光） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| ELISA/WB推荐稀释度 | 1:4000-12000 |
| 稀释性能 | 可稀释到数万倍后仍具有使用价值 |
| 起始工作浓度参考 | 1:5000-1:8000（ELISA） |
三、产品特点
-
HRP标记——高灵敏度检测
HRP可实现酶催化信号放大，适合各种免疫检测实验。 -
SPG——广谱IgG结合
可结合人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪等多种物种的IgG，是一种通用型检测试剂。 -
高稀释倍数——经济耐用
推荐稀释度1:4000-12000，使用得当可稀释到数万倍后仍具有使用价值。 -
操作简便
替代传统物种特异性二抗，一个试剂即可检测多个物种的IgG。
四、SPG结合特性
| 结合强度 | 物种 |
|---|---|
| 强结合 | 人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪 |
| 弱结合 | 考拉、狗、美洲驼 |
| 不结合 | 鸟类IgY、动物IgM、动物IgA |
重要提示：SPG不结合鸟类IgY和动物的IgM、IgA，请勿用于检测这些免疫球蛋白类型。
五、主要应用场景
1. 通用型ELISA检测（替代物种特异性二抗）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被特异性抗原 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入待测血清样品（人、小鼠、兔、羊等） |
| 4 | 加入HRP-SPG（1:5000-8000稀释） |
| 5 | 加TMB显色 |
优势：无需为不同物种准备不同的二抗，一个试剂即可完成多物种检测。
2. 多物种血清抗体筛查
在比较免疫学或跨物种研究中，使用HRP-SPG可同时检测多个物种血清中的特异性IgG抗体水平。
3. Western Blot中的通用检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | SDS-PAGE电泳、转膜 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入一抗（人、小鼠、兔等来源） |
| 4 | 加入HRP-SPG（1:5000-8000稀释） |
| 5 | ECL化学发光检测 |
4. 抗体纯化中的检测
- 检测蛋白G亲和层析纯化过程中的IgG洗脱峰
- 评估纯化后IgG的回收率
5. 杂交瘤筛选中的通用检测
在筛选人、小鼠等来源的杂交瘤细胞时，使用HRP-SPG可检测培养上清中的IgG抗体。
六、实验操作要点
1. 通用型ELISA方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 包被特异性抗原 | 4℃过夜 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或脱脂奶粉 |
| 3 | 加入待测血清样品 | 室温孵育1-2小时 |
| 4 | 洗涤 | 3-5次 |
| 5 | 加入HRP-SPG | 1:5000-8000稀释，室温30-60分钟 |
| 6 | 洗涤 | 3-5次 |
| 7 | 加TMB显色 | 15-20分钟 |
| 8 | 终止读数 | 450nm |
2. Western Blot方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | SDS-PAGE、转膜 | 常规操作 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或脱脂奶粉 |
| 3 | 加入一抗 | 按一抗说明书稀释 |
| 4 | 洗涤 | 3-5次 |
| 5 | 加入HRP-SPG | 1:5000-8000稀释，室温30-60分钟 |
| 6 | 洗涤 | 3-5次 |
| 7 | ECL检测 | 化学发光成像 |
3. 稀释液选择
| 推荐稀释液 | 说明 |
|---|---|
| 含0.05%吐温-20的0.01M PBS（pH 7.0） | 首选 |
重要提示：配成的工作液建议一次使用完；若需长期存放、多次使用，请添加合适的稳定剂（可联系购买）。
4. 工作浓度优化建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| ELISA | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
| Western Blot | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
5. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阳性对照 | 已知阳性血清（强结合物种） | 验证检测体系 |
| 阴性对照 | 无血清样品孔 | 评估背景 |
| 二抗对照 | 使用传统物种特异性二抗 | 比较检测效率 |
6. 重要操作提示
- SPG结合IgG的Fc片段，不结合Fab片段，因此不与结合抗原后的一抗竞争
- SPG不结合鸟类IgY和动物IgM/IgA，请勿用于检测这些抗体类型
- 对于弱结合物种（考拉、狗、美洲驼），建议增加HRP-SPG浓度或延长孵育时间
- 某些物种（如山羊）的IgG也可能存在亚类差异，建议预实验验证
- 请使用正确的稀释液，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 有效期 | 以产品标签为准；有效期过后很长一段时间仍可使用，但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免污染和失效 |
八、常见问题
Q1：HRP-SPG的主要用途是什么？
A1：作为一种通用型检测试剂，替代传统物种特异性二抗，用于ELISA、Western Blot等实验中人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪等物种IgG的检测。
Q2：SPG与蛋白A（Protein A）有什么区别？
A2：
| 特性 | 蛋白G（SPG） | 蛋白A |
|---|---|---|
| 物种谱 | 更广（人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪等） | 较窄（人、兔、猪等） |
| 人IgG亚类 | 结合所有亚类 | IgG3不结合 |
| 小鼠IgG亚类 | 结合所有亚类 | IgG1结合弱 |
| 大鼠IgG | 结合 | 不结合 |
推荐使用SPG，物种谱更广、结合更强。
Q3：本产品可以检测鸟类抗体吗？
A3：不可以。SPG不结合鸟类IgY。请使用抗鸡IgY或抗鸭IgY等特异性二抗。
Q4：本产品可以检测IgM或IgA吗？
A4：不可以。SPG特异性结合IgG的Fc片段，不结合IgM和IgA。
Q5：如何确定最佳稀释度？
A5：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:2000开始倍比稀释至1:32000，选择信噪比最高的稀释度。
Q6：产品如何保存？
A6：请存放于-20℃，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
Q7：本产品可以用于检测狗IgG吗？
A7：可以，但狗IgG与SPG为弱结合，建议增加HRP-SPG浓度或延长孵育时间。如需最佳检测效果，推荐使用HRP-狗IgG特异性二抗。
本产品已通过多家客户验证，灵敏度高、特异性好，适用于ELISA、Western Blot等免疫检测实验。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）