FITC-SPA：选择性IgG检测的绿色荧光探针
在免疫学检测中，蛋白A（Staphylococcal Protein A，SPA）是一种经典的IgG结合蛋白，能够与多种哺乳动物IgG的Fc段特异性结合。当SPA被绿色荧光标记时，它便成为一种选择性检测工具——适用于特定物种和亚类IgG的快速检测。
今天，我们以FITC-SPA为例，为您解析这类产品在IgG检测中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | FITC-SPA |
| 标记物 | FITC（异硫氰酸荧光素） |
| 蛋白 | 蛋白A（SPA） |
| 浓度 | 以蛋白计1mg/mL左右 |
| 激发/发射波长 | 488nm/520nm |
| 规格 | 1mg/支 |
| 保存条件 | -20℃ |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 应用平台 | 推荐稀释度 | 起始工作浓度 |
|---|---|---|
| Flow Cyt/IF | 1:150-1500 | 1:500 |
| IHC | 1:500-2500 | 1:1000 |
| ELISA | 可适用（需避光） | 根据实验优化 |
三、产品特点
1. FITC标记——绿色荧光
FITC是流式细胞术和免疫荧光中最常用的绿色荧光染料，与488nm激光器完美匹配，可直接检测，无需二抗。
2. 选择性结合——特定物种/亚类
SPA对不同种属的动物免疫球蛋白结合能力不同，具有选择性。
3. 一步检测
无需二抗孵育，操作简便、背景低。
4. 多色兼容
与PE、APC等荧光染料兼容，支持多色标记实验。
四、SPA结合谱
强结合（推荐使用）：
| 物种 | 亚类/类型 | 结合能力 |
|---|---|---|
| 人 | IgG1、IgG2、IgG4 | 强 |
| 狗 | IgG | 强 |
| 豚鼠 | IgG | 强 |
| 猴 | IgG | 强 |
| 小鼠 | IgG2a、IgG2b | 强 |
| 猪 | IgG | 强 |
| 兔 | IgG | 强 |
不适合使用：
| 物种 | 亚类/类型 | 说明 |
|---|---|---|
| 人 | IgG3 | 不结合 |
| 鸟类 | IgY | 不结合 |
| 山羊 | IgG | 不结合 |
| 考拉 | IgG | 不结合 |
| 美洲驼 | IgG | 不结合 |
| 大鼠 | IgG | 不结合 |
| 小鼠 | IgG1 | 不结合 |
| 所有物种 | IgM、IgA | 不结合 |
五、SPA vs SPG：如何选择？
| 对比维度 | FITC-SPA | FITC-SPG |
|---|---|---|
| 结合谱 | 选择性 | 广谱 |
| 人IgG亚类 | IgG1/IgG2/IgG4 | 所有亚型 |
| 小鼠IgG亚类 | IgG2a/IgG2b | 所有亚型 |
| 大鼠IgG | 不结合 | 强结合 |
| 山羊IgG | 不结合 | 强结合 |
| 牛IgG | 不结合 | 强结合 |
| 适用场景 | 特定物种/亚类检测 | 多物种通用检测 |
六、主要应用场景
1. 流式细胞术中检测特定物种IgG
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 制备细胞悬液（如人、兔、猪等） |
| 2 | 封闭Fc受体 |
| 3 | 加FITC-SPA（1:500-1000稀释） |
| 4 | 4℃避光孵育30分钟 |
| 5 | 洗涤后流式上机 |
2. 免疫荧光中检测组织中的IgG沉积
- 组织切片脱蜡、抗原修复
- 加FITC-SPA（1:500-1000稀释）
- 避光孵育1小时
- 荧光显微镜观察
3. ELISA中检测特定物种IgG
- 包被抗原
- 加入相应物种的IgG
- 加FITC-SPA检测
- 荧光酶标仪读数
4. 抗体纯化的质控
- 将FITC-SPA与IgG标准品孵育
- 检测结合效率
- 评估SPA亲和介质的性能
七、实验操作要点
1. 流式细胞术染色方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 制备单细胞悬液 | PBMC或组织单细胞 |
| 2 | 封闭Fc受体 | 减少非特异性结合 |
| 3 | 加FITC-SPA | 1:500-1000稀释，4℃避光30分钟 |
| 4 | 洗涤 | PBS洗涤2次 |
| 5 | 流式上机 | 488nm激光器，FITC通道检测 |
2. 免疫荧光染色方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 组织切片或细胞爬片 | 固定、透膜处理 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或血清的缓冲液 |
| 3 | 加FITC-SPA | 1:500-1000稀释，避光1小时 |
| 4 | 洗涤 | PBS洗涤3次 |
| 5 | 封片 | 含抗淬灭剂的封片剂 |
| 6 | 荧光显微镜观察 | 使用FITC滤光片组 |
3. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阴性对照 | 不加FITC-SPA | 评估自发荧光 |
| 竞争对照 | 加过量未标记SPA | 验证结合特异性 |
| 物种对照 | 已知阳性物种IgG | 验证结合活性 |
4. 重要操作提示
- 避光操作：FITC光稳定性较差，全程需避光
- 物种选择：使用前确认待检测物种/亚类在SPA结合谱内
八、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃保存，避光 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议分装保存 |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
九、常见问题
Q1：FITC-SPA能检测哪些物种的IgG？
A1：强结合人IgG1/IgG2/IgG4、狗、豚鼠、猴、小鼠IgG2a/IgG2b、猪、兔的IgG。不适合人IgG3、鸟类IgY、山羊、考拉、美洲驼、大鼠、小鼠IgG1及所有IgM/IgA。
Q2：FITC-SPA与FITC-SPG有什么区别？
A2：
| 对比维度 | FITC-SPA | FITC-SPG |
|---|---|---|
| 结合谱 | 选择性 | 广谱 |
| 大鼠IgG | 不结合 | 强结合 |
| 山羊IgG | 不结合 | 强结合 |
| 适用场景 | 特定物种检测 | 多物种通用检测 |
Q3：能否用于检测小鼠IgG1？
A3：不能。SPA对小鼠IgG1结合能力极弱，检测小鼠IgG1时应使用FITC-SPG。
Q4：能否用于检测IgM或IgA？
A4：不能。SPA特异性结合IgG的Fc段，不结合IgM和IgA。
Q5：如何确定最佳稀释度？
A5：建议通过预实验进行滴定：将FITC-SPA从1:200开始倍比稀释至1:6400，选择信噪比最高的稀释度。
Q6：产品如何保存？
A6：请存放于**-20℃**保存，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品已通过多家客户验证，适用于流式细胞术、免疫荧光、ELISA等免疫检测实验。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）