FITC-SPG：多物种IgG检测的绿色荧光通用探针
在免疫学检测中，蛋白G（Streptococcal Protein G，SPG）是一种广谱IgG结合蛋白，能够与多种哺乳动物IgG的Fc段特异性结合。当SPG被绿色荧光标记时，它便成为一种通用型检测工具——无需针对每个物种制备特异性二抗，即可检测多种来源的IgG。
今天，我们以FITC-SPG为例，为您解析这类产品在多物种IgG检测中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | FITC-SPG |
| 标记物 | FITC（异硫氰酸荧光素） |
| 蛋白 | 蛋白G（SPG） |
| 浓度 | 以蛋白计1mg/mL左右 |
| 激发/发射波长 | 488nm/520nm |
| 规格 | 1mg/支 |
| 保存条件 | -20℃ |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 应用平台 | 推荐稀释度 | 起始工作浓度 |
|---|---|---|
| Flow Cyt/IF | 1:150-1500 | 1:500 |
| IHC | 1:500-2500 | 1:1000 |
| ELISA | 可适用（需避光） | 根据实验优化 |
三、产品特点
1. FITC标记——绿色荧光
FITC是流式细胞术和免疫荧光中最常用的绿色荧光染料，与488nm激光器完美匹配，可直接检测，无需二抗。
2. 广谱结合——多物种通用
蛋白G能结合人、小鼠、大鼠IgG的所有亚型，也能结合兔、羊、牛、马、猪等物种的IgG。
3. 一步检测
无需二抗孵育，操作简便、背景低。
4. 多色兼容
与PE、APC等荧光染料兼容，支持多色标记实验。
四、SPG结合谱
| 结合能力 | 物种 | 说明 |
|---|---|---|
| 强结合 | 人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪 | 推荐使用 |
| 弱结合 | 考拉、狗、美洲驼 | 可能结合 |
| 不结合 | 鸟类（IgY）、动物IgM/IgA | 不适用 |
SPG vs SPA：
- SPG：广谱结合，适合多物种通用检测
- SPA：选择性结合（人IgG1/IgG2/IgG4、兔、猪等）
五、主要应用场景
1. 流式细胞术中检测多种物种IgG
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 制备不同物种的细胞悬液 |
| 2 | 封闭Fc受体 |
| 3 | 加FITC-SPG（1:500-1000稀释） |
| 4 | 4℃避光孵育30分钟 |
| 5 | 洗涤后流式上机 |
优势：无需为每个物种准备特异性二抗，一种试剂即可完成。
2. 免疫荧光中检测组织中的IgG沉积
- 组织切片脱蜡、抗原修复
- 加FITC-SPG（1:500-1000稀释）
- 避光孵育1小时
- 荧光显微镜观察
3. ELISA中检测多种物种IgG
- 包被抗原
- 加入不同物种的IgG
- 加FITC-SPG检测
- 荧光酶标仪读数
4. 免疫沉淀中捕获IgG
- FITC-SPG与磁珠偶联
- 加入含IgG的样本
- 洗涤后洗脱
- 用于WB检测
5. 抗体纯化的质控
- 将FITC-SPG与IgG标准品孵育
- 检测结合效率
- 评估亲和介质的性能
六、实验操作要点
1. 流式细胞术染色方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 制备单细胞悬液 | PBMC或组织单细胞 |
| 2 | 封闭Fc受体 | 减少非特异性结合 |
| 3 | 加FITC-SPG | 1:500-1000稀释，4℃避光30分钟 |
| 4 | 洗涤 | PBS洗涤2次 |
| 5 | 流式上机 | 488nm激光器，FITC通道检测 |
2. 免疫荧光染色方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 组织切片或细胞爬片 | 固定、透膜处理 |
| 2 | 封闭 | 含BSA或血清的缓冲液 |
| 3 | 加FITC-SPG | 1:500-1000稀释，避光1小时 |
| 4 | 洗涤 | PBS洗涤3次 |
| 5 | 封片 | 含抗淬灭剂的封片剂 |
| 6 | 荧光显微镜观察 | 使用FITC滤光片组 |
3. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阴性对照 | 不加FITC-SPG | 评估自发荧光 |
| 竞争对照 | 加过量未标记SPG | 验证结合特异性 |
| 物种对照 | 已知阳性物种IgG | 验证结合活性 |
4. 重要操作提示
- 避光操作：FITC光稳定性较差，全程需避光
- Fc受体阻断：检测Fc受体阳性细胞时，必须使用Fc受体阻断剂
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃保存，避光 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议分装保存 |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
八、常见问题
Q1：FITC-SPG能检测哪些物种的IgG？
A1：能强结合人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪的IgG；对考拉、狗、美洲驼IgG有弱结合；不结合鸟类IgY和动物IgM/IgA。
Q2：FITC-SPG与FITC-SPA有什么区别？
A2：
| 对比维度 | FITC-SPG | FITC-SPA |
|---|---|---|
| 结合谱 | 广谱 | 选择性 |
| 适用物种 | 人、小鼠、大鼠、兔、羊、牛、马、猪 | 人IgG1/IgG2/IgG4、兔、猪等 |
| 不适用 | 鸟类IgY、IgM/IgA | 人IgG3、小鼠IgG1等 |
Q3：能否用于检测IgM或IgA？
A3：不能。SPG特异性结合IgG的Fc段，不结合IgM和IgA。如需检测IgM或IgA，请选择物种特异性的抗IgM或抗IgA二抗。
Q4：在流式细胞术中，如何避免非特异性结合？
A4：建议：
- 使用Fc受体阻断剂预处理细胞
- 使用含BSA的染色缓冲液
- 设置阴性对照（不加FITC-SPG）
- 如背景仍高，可降低工作浓度或缩短孵育时间
Q5：如何确定最佳稀释度？
A5：建议通过预实验进行滴定：将FITC-SPG从1:200开始倍比稀释至1:6400，选择信噪比最高的稀释度。
Q6：产品如何保存？
A6：请存放于**-20℃**保存，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品已通过多家客户验证，适用于流式细胞术、免疫荧光、ELISA等免疫检测实验。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）