非洲猪瘟病毒P72蛋白真核表达系统的构建与应用研究

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，对全球养猪业构成严重威胁。该病毒结构复杂，其衣壳蛋白P72作为主要的结构蛋白，约占病毒颗粒总蛋白的三分之一，在病毒组装和免疫识别中扮演关键角色。深入研究P72蛋白的特性与功能，对于开发新型诊断技术与防控制品具有重要理论价值与实践意义。传统原核表达系统虽操作简便，但难以实现P72蛋白的正确折叠与翻译后修饰，因此构建高效的真核表达系统成为当前研究的热点。

在P72蛋白真核表达系统的构建过程中，表达载体的选择与优化是首要环节。研究表明，杆状病毒-昆虫细胞表达系统与哺乳动物细胞表达系统均能有效介导P72蛋白的表达。杆状病毒系统凭借其高表达量及较强的蛋白加工能力，能够实现P72蛋白的可溶性表达与天然构象维持。通过密码子优化、信号肽引入以及启动子强化等策略，可进一步提升P72蛋白在真核宿主中的表达效率与稳定性，为后续研究奠定坚实基础。

表达系统的成功构建之后，对重组P72蛋白的鉴定与纯化是验证其功能的关键步骤。采用Western Blot技术，利用非洲猪瘟病毒阳性血清可以特异性识别表达产物，证实其具备良好的抗原性。通过密度梯度离心或金属螯合亲和层析等方法，可从细胞裂解上清或培养液中获得高纯度的P72蛋白。对纯化蛋白进行结构分析，如圆二色谱或电镜观察，可验证其高级结构的正确性，确保其与天然病毒来源的P72蛋白在构象上具有高度相似性。

纯化的P72蛋白在血清学诊断方法的建立中展现出巨大应用潜力。以其作为包被抗原，成功开发出酶联免疫吸附试验检测试剂盒。此类试剂盒能够特异性地检测感染猪只血清中的特异性抗体，与商业化试剂盒相比，在敏感性与特异性方面表现出良好的一致性。这为非洲猪瘟的早期诊断、疫情监测及净化提供了可靠的技术支持，尤其适用于大规模血清学筛查，具有重要的推广应用价值。

在疫苗研发领域，基于真核系统表达的P72蛋白亦显示出广阔前景。作为病毒的主要衣壳蛋白，P72能够诱导机体产生特异性体液免疫应答。研究证实，重组P72蛋白免疫动物后可激发高水平的中