小鼠抗His-Tag单克隆抗体：蛋白纯化与检测的核心工具
在蛋白表达纯化、免疫共沉淀及蛋白互作研究领域，His标签（通常为6×His）因其分子量小、免疫原性低、不影响蛋白天然构象而成为应用最广泛的标签之一。高特异性的抗His-Tag单克隆抗体是实现His标签融合蛋白检测、纯化和鉴定的核心工具。小鼠抗His-Tag单抗以其高特异性、高纯度和批次稳定性，成为蛋白互作与纯化检测的理想选择。
今天，我们以小鼠抗His-Tag单抗（克隆号HCV-15）为例，为您解析其在蛋白互作与纯化检测中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | 小鼠抗His-Tag |
| 免疫原/特异性 | His标签（6×His等），不识别其它标签蛋白 |
| 单抗克隆号 | HCV-15 |
| 亚类/轻链 | 小鼠IgG2b，Kappa轻链 |
| 制备方法 | 大规模细胞培养法 |
| 蛋白浓度 | OD280吸光值一般为7，对应蛋白浓度约5mg/mL（具体以标签为准） |
| 缓冲液成分 | 0.01M PBS，pH 7.2，N防腐剂（CMIT/MIT/THYMOL） |
| 产品纯度 | 以抗体计不低于90% |
| 保存条件 | -20℃（或-16℃及以下温度） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 特异性 | 识别His标签（6×His等），不识别其它标签蛋白 |
| 纯度 | ≥90% |
| 亚类 | 小鼠IgG2b，Kappa轻链 |
| 适用平台 | ELISA、Western Blot、免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF）、流式细胞术等 |
三、产品特点
-
His标签特异性——精准识别
特异性针对多聚组氨酸标签（His tag），不识别其它标签蛋白，确保检测结果的准确性。 -
单克隆抗体——批次稳定性高
通过大规模细胞培养法获得，批间一致性优异，适合标准化试剂盒开发。 -
高纯度（≥90%）——背景低
以抗体计纯度不低于90%，非特异性吸附少，实验结果更可靠。 -
多平台兼容
适用于Western Blot、ELISA、免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF）、流式细胞术等多种检测平台。
四、His-Tag检测的应用意义
| 应用领域 | 应用说明 |
|---|---|
| 蛋白表达检测 | 检测原核/真核表达的His标签融合蛋白 |
| 蛋白纯化监测 | 监测Ni-NTA亲和纯化过程中的蛋白洗脱 |
| 免疫沉淀（IP） | 使用抗His-Tag抗体捕获His标签融合蛋白及其互作蛋白 |
| Western Blot | 检测His标签融合蛋白的表达和纯度 |
| 免疫荧光（IF） | 检测细胞中His标签融合蛋白的定位 |
| 流式细胞术 | 检测细胞表面或胞内His标签融合蛋白的表达 |
五、主要应用场景
1. Western Blot检测（核心应用）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | SDS-PAGE电泳、转膜 |
| 2 | 封闭（推荐使用无His标签的脱脂奶粉或BSA） |
| 3 | 加入小鼠抗His-Tag单抗（1:1000-5000稀释） |
| 4 | 加入HRP-抗小鼠IgG二抗（注意：二抗需识别IgG2b亚类） |
| 5 | ECL化学发光检测 |
2. 免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（Co-IP）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞裂解液与小鼠抗His-Tag单抗孵育 |
| 2 | 加入Protein A/G琼脂糖珠（注意：Protein A/G需结合IgG2b亚类） |
| 3 | 洗涤后，WB检测使用抗靶标蛋白抗体 |
3. ELISA检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 直接包被His标签融合蛋白或细胞裂解液 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠抗His-Tag单抗（1:1000-5000稀释） |
| 4 | 加入HRP-抗小鼠IgG二抗 |
| 5 | 加TMB显色 |
4. 免疫荧光（IF）/流式细胞术
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞固定、透化（如需胞内染色） |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠抗His-Tag单抗（1:200-1000稀释） |
| 4 | 加入荧光标记的抗小鼠IgG二抗（注意：二抗需识别IgG2b亚类） |
| 5 | 荧光显微镜观察或流式细胞仪检测 |
六、实验操作要点
1. Western Blot方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 转膜后封闭 | 室温1小时，使用5%脱脂奶粉或BSA |
| 2 | 加入小鼠抗His-Tag单抗 | 1:1000-5000稀释，4℃过夜或室温2小时 |
| 3 | 洗涤 | TBST洗涤3次，每次10分钟 |
| 4 | 加入HRP-抗小鼠IgG二抗 | 按说明书稀释，室温1小时（注意：二抗需识别IgG2b亚类） |
| 5 | 洗涤 | TBST洗涤3次 |
| 6 | ECL显色 | 化学发光成像 |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| Western Blot | 1:2000 | 1:1000-1:5000 |
| ELISA | 1:2000 | 1:1000-1:5000 |
| IF | 1:500 | 1:200-1:1000 |
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:200-1:1000 |
| IP | 2-5μg/次 | 1-10μg/次 |
3. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阳性对照 | 已知His标签融合蛋白表达样品 | 验证检测体系 |
| 阴性对照 | 无His标签的空白对照细胞/样品 | 评估背景 |
| 标签特异性对照 | 含GST、Flag等其它标签的蛋白 | 验证不识别—应无显著信号 |
| 二抗对照 | 不加一抗，只加二抗 | 评估二抗非特异性结合 |
4. 重要操作提示
- 二抗选择注意事项：本产品为小鼠IgG2b亚类，选购二抗时请确认二抗能够识别小鼠IgG2b亚类（部分抗小鼠IgG二抗可能对IgG1、IgG2a有偏好，对IgG2b识别较弱）。
- 封闭液选择：使用无His标签的脱脂奶粉或BSA，避免封闭剂与抗体非特异性结合。
- His标签位置：注意His标签可能位于蛋白的N端或C端，确保表位可及。
- IP注意事项：选择Protein A/G时需确认对IgG2b的结合能力（Protein G通常结合更广）。
- 请使用正确的实验方法，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果。
七、二抗选择指南
| 二抗类型 | 对小鼠IgG2b结合能力 | 推荐 |
|---|---|---|
| 抗小鼠IgG（H+L） | 通常可识别 | ✅ 推荐 |
| 抗小鼠IgG1特异性 | 不识别 | ❌ 不适用 |
| 抗小鼠IgG2a特异性 | 不识别 | ❌ 不适用 |
| Protein A | 结合力中等 | 可选 |
| Protein G | 结合力强 | ✅ 推荐（IP实验） |
建议：如需最高结合效率，推荐使用抗小鼠IgG（H+L） 二抗或Protein G。
八、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存（或-16℃及以下温度） |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 长期4℃存放 | 如需长期4℃存放，请联系我们定制 |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
| 用途限制 | 仅用于科研，不用于诊断 |
九、常见问题
Q1：小鼠抗His-Tag单抗（HCV-15）的主要用途是什么？
A1：主要用于Western Blot、ELISA、免疫沉淀（IP）、免疫荧光（IF） 等实验中对His标签融合蛋白的检测。适用于蛋白表达检测、纯化监测、蛋白互作研究等。
Q2：本产品为IgG2b亚类，选购二抗时需要注意什么？
A2：请确认二抗能够识别小鼠IgG2b亚类。推荐使用抗小鼠IgG（H+L） 二抗，或确认二抗说明书明确标注识别IgG2b。Protein G在IP实验中结合效果好。
Q3：本产品能识别其它标签蛋白吗？
A3：不能。本品特异性识别His标签，不识别GST、Flag、Myc、HA等其它标签蛋白。
Q4：本产品可以用于免疫沉淀（IP）吗？
A4：可以。建议每反应使用2-5μg抗体，配合Protein G琼脂糖珠使用（Protein G对IgG2b结合能力强）。
Q5：His标签在蛋白的N端和C端都能被识别吗？
A5：通常可以，但需根据蛋白折叠情况验证。如果His标签被折叠在蛋白内部，可能影响识别，建议使用变性条件或选择其他检测方法。
Q6：如何确定最佳稀释度？
A6：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:500开始倍比稀释至1:10000，选择信噪比最高的稀释度。
Q7：产品如何保存？
A7：请存放于-20℃，避免反复冻融，建议分装保存。如需长期4℃存放，请联系我们定制。
本产品为抗His标签特异性单克隆抗体，特异性高、纯度高、批次稳定，已通过多家客户验证，适用于Western Blot、ELISA、IP、IF等多种免疫检测实验。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）