FITC-小鼠抗人IgE：过敏性疾病荧光检测与B细胞分析的核心工具
在临床免疫检测和变态反应研究领域，人IgE是介导I型超敏反应的关键免疫球蛋白，其水平升高与过敏性哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、食物过敏及寄生虫感染等密切相关。IgE在血清中含量极低（仅占免疫球蛋白总量的0.003%左右），对检测灵敏度要求极高。FITC标记的小鼠抗人IgE将绿色荧光标记与高特异性抗体相结合，适用于流式细胞术、免疫荧光（IF）等荧光检测实验，是过敏性疾病诊断与研究的理想选择。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | FITC-小鼠抗人IgE（FITC标记） |
| 宿主来源 | 小鼠 |
| 特异性 | 识别人IgE（ε重链特异性） |
| 标记物 | FITC（异硫氰酸荧光素，绿色荧光） |
| 激发/发射波长 | Ex: 490nm / Em: 520nm（典型值） |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%BSA、N防腐剂（CMIT/MIT/THYMOL） |
| 保存条件 | -20℃避光保存（注意避光，防止荧光淬灭） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 流式细胞术/IF | 1:150-1500 |
| IHC | 1:500-2500 |
| ELISA | 可适用 |
| 识别范围 | 人IgE |
| 荧光颜色 | 绿色（FITC） |
三、产品特点
-
FITC标记——绿色荧光检测
FITC是经典的绿色荧光染料，激发波长约490nm，发射波长约520nm，与流式细胞仪的FITC通道（通常为FL1通道）完美匹配。 -
人IgE特异性——精准识别
特异性针对人IgE的ε重链，不与人IgG、IgM、IgA等其它免疫球蛋白交叉反应。 -
多平台兼容
特别适用于流式细胞术和免疫荧光（IF），也可用于IHC和ELISA。 -
高稀释倍数
流式/IF推荐稀释度1:150-1500，经济耐用。
四、FITC荧光标记的特点
| 特性 | 说明 |
|---|---|
| 荧光颜色 | 绿色 |
| 激发波长 | 约490nm（氩离子激光器488nm常用） |
| 发射波长 | 约520nm |
| 流式通道 | FITC通道（通常为FL1） |
| 光稳定性 | 中等（注意避光保存和使用） |
| pH敏感性 | 在碱性条件下荧光增强，酸性条件下减弱 |
五、人IgE检测的临床与科研意义
| 应用领域 | 检测意义 |
|---|---|
| 总IgE检测 | 评估过敏体质，辅助诊断过敏性疾病 |
| 过敏原特异性IgE检测 | 识别致敏过敏原（尘螨、花粉、食物等） |
| 过敏性哮喘 | 监测IgE水平，指导抗IgE治疗（如奥马珠单抗） |
| 特应性皮炎 | 评估疾病活动度和治疗反应 |
| 过敏性鼻炎 | 辅助诊断和疗效监测 |
| 食物过敏 | 诊断食物过敏原 |
| 嗜碱性粒细胞活化检测（流式细胞术） | 检测细胞表面IgE表达 |
| 寄生虫感染 | 血清IgE升高提示寄生虫感染可能 |
六、主要应用场景
1. 流式细胞术——嗜碱性粒细胞表面IgE检测（核心应用）
原理：FITC标记的抗IgE抗体与嗜碱性粒细胞表面IgE结合，通过流式细胞仪检测。
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 分离人外周血单个核细胞（PBMC） |
| 2 | 封闭Fc受体（使用人IgG） |
| 3 | 加入FITC-小鼠抗人IgE（1:150-1500稀释） |
| 4 | 避光孵育（30分钟） |
| 5 | 洗涤、重悬 |
| 6 | 流式细胞仪检测（FITC通道） |
2. 免疫荧光（IF）——组织/细胞染色
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片或细胞爬片固定、透化 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入一抗（人源，未标记） |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-小鼠抗人IgE（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育（30-60分钟） |
| 7 | 洗涤、DAPI染核（可选） |
| 8 | 荧光显微镜观察（绿色荧光） |
3. 免疫组化（IHC）——荧光法
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片脱蜡、抗原修复 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入一抗（人源） |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-小鼠抗人IgE（1:500-2500稀释） |
| 6 | 避光孵育 |
| 7 | 洗涤、封片 |
| 8 | 荧光显微镜观察 |
4. 过敏原特异性IgE ELISA（荧光检测法）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被特异性过敏原（如尘螨提取物、花生蛋白） |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入人血清样品 |
| 4 | 加入FITC-小鼠抗人IgE |
| 5 | 使用荧光酶标仪检测（Ex/Em = 490/520nm） |
七、实验操作要点
1. 流式细胞术方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 细胞计数，调整至1×10⁶-1×10⁷/mL | 每管100μL |
| 2 | 固定、透化（如需胞内染色） | 使用商业固定/透化试剂盒 |
| 3 | 封闭Fc受体 | 使用人IgG或商业Fc阻断剂 |
| 4 | 加入FITC-小鼠抗人IgE | 1:150-1500稀释，避光30分钟 |
| 5 | 洗涤 | PBS+1%BSA，2-3次 |
| 6 | 重悬于PBS或固定液 | 立即上机或4℃避光保存 |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IF | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IHC | 1:1000 | 1:500-1:2500 |
| ELISA（荧光法） | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
3. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阳性对照 | 已知高IgE人血清或细胞 | 验证检测体系 |
| 阴性对照 | 不加一抗，只加FITC-二抗 | 评估二抗非特异性结合 |
| 同型对照 | 同型对照一抗 + FITC-二抗 | 评估背景荧光 |
| 未染色对照 | 不加任何抗体 | 评估细胞自发荧光 |
4. 重要操作提示
- 避光操作：FITC是光敏染料，整个实验过程（特别是加入FITC-二抗后）应尽量避光，防止荧光淬灭。
- 人IgE含量极低：血清中IgE含量极低（正常成人约20-100 IU/mL），对检测灵敏度要求高。本产品的荧光标记系统适用于高灵敏度检测。
- Fc受体封闭：流式细胞术和IF实验中，建议使用人IgG或商业Fc受体封闭剂封闭Fc受体，降低非特异性结合。
- 固定剂选择：如需固定，使用含低浓度甲醛的固定液（如1-2% PFA），避免使用含甲醇的固定剂（可能影响荧光）。
- 荧光检测：使用流式细胞仪的FITC通道（FL1）或荧光显微镜的FITC滤光片组（激发470-495nm，发射515-530nm）。
- 请使用正确的稀释液，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果。
八、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 避光要求 | 务必避光，防止荧光淬灭 |
| 有效期 | 以产品标签为准；有效期过后很长一段时间仍可使用，但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免污染和失效 |
九、常见问题
Q1：FITC-小鼠抗人IgE的主要用途是什么？
A1：主要用于流式细胞术和免疫荧光（IF） 实验中对人IgE的特异性荧光检测。适用于过敏性疾病研究、嗜碱性粒细胞表面IgE检测、B细胞免疫表型分析、过敏原特异性IgE检测等。
Q2：FITC的激发和发射波长是多少？
A2：
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 最大激发波长 | 约490nm |
| 最大发射波长 | 约520nm |
| 流式通道 | FITC通道（通常为FL1） |
| 荧光颜色 | 绿色 |
Q3：为什么检测IgE需要高灵敏度系统？
A3：人血清中IgE含量极低，仅占免疫球蛋白总量的约**0.003%**（正常成人约20-100 IU/mL）。荧光标记系统配合流式细胞术或荧光ELISA可提供较高的检测灵敏度。
Q4：本产品可以用于过敏原特异性IgE检测吗？
A4：可以。将特异性过敏原（如尘螨、花粉、牛奶、花生等）包被于ELISA板，加入待测血清，再用本产品检测结合的特异性IgE，可采用荧光酶标仪检测。
Q5：如何避免FITC荧光淬灭？
A5：
- 实验全程避光（使用铝箔包裹试管/避光盒）
- 观察时尽量减少激发光照射时间
- 使用抗荧光淬灭封片剂（IF/IHC）
- 尽快上机检测（流式）
Q6：如何确定最佳稀释度？
A6：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:150开始倍比稀释至1:3000，选择信噪比最高的稀释度。
Q7：产品如何保存？
A7：请存放于**-20℃，严格避光**，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品为FITC标记的小鼠抗人IgE抗体，已通过多家客户验证，灵敏度高、特异性好、背景低，特别适用于流式细胞术和免疫荧光（IF） 实验，是过敏性疾病研究与B细胞分析的核心工具。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）