FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)：高特异性人IgG荧光检测与Fc相关研究的核心工具
在临床免疫检测和生物医药研发领域，人IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是评估体液免疫、自身抗体及疫苗应答的关键指标。Fc特异性抗体识别IgG的Fc片段（重链恒定区），相比H+L特异性抗体，具有更低的背景和更高的特异性，特别适合用于Fc受体相关研究、免疫复合物检测以及需要避免轻链交叉反应的实验。本产品为经过交叉吸附处理的山羊抗人IgG(Fc特异性)，不识别小鼠IgG，并采用FITC标记，是流式细胞术和免疫荧光检测的理想工具。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)（FITC标记） |
| 宿主来源 | 山羊 |
| 特异性 | 识别人IgG的Fc片段，经交叉吸附处理，不识别小鼠IgG |
| 标记物 | FITC（异硫氰酸荧光素，绿色荧光） |
| 激发/发射波长 | Ex: 490nm / Em: 520nm（典型值） |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%GSA、N防腐剂（CMIT/MIT/THYMOL） |
| 保存条件 | -20℃避光保存（注意避光，防止荧光淬灭） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 流式细胞术/IF | 1:150-1500 |
| IHC | 1:500-2500 |
| ELISA | 可适用 |
| 识别区域 | 人IgG Fc片段 |
| 交叉反应 | Fc特异性，经吸附处理，不识别小鼠IgG |
| 荧光颜色 | 绿色（FITC） |
三、产品特点
-
Fc特异性——识别IgG重链恒定区
特异性识别人IgG的Fc片段，不识别Fab片段，不识别IgM、IgA、IgE，也不识别还原变性后的IgG重链。 -
不交叉小鼠IgG——小鼠体系友好
经过严格的交叉吸附处理，本产品不识别小鼠IgG，适用于小鼠-人双物种实验体系。 -
FITC标记——绿色荧光检测
FITC是经典的绿色荧光染料，激发波长约490nm，发射波长约520nm，与流式细胞仪的FITC通道（通常为FL1通道）完美匹配。 -
多平台兼容
特别适用于流式细胞术和免疫荧光（IF），也可用于IHC和ELISA。 -
山羊源优势：种属差异大，非特异性交叉反应极低，背景干净。
四、Fc特异性 vs H+L特异性
| 特性 | Fc特异性 | H+L特异性 |
|---|---|---|
| 识别区域 | 仅Fc片段（重链恒定区） | 重链+轻链 |
| 识别完整IgG | 是 | 是 |
| 识别IgG片段（Fab） | 否 | 是 |
| 识别其他Ig类型（IgM/IgA） | 否 | 可能（取决于吸附） |
| 背景水平 | 更低 | 中等 |
| 适用场景 | Fc受体研究、免疫复合物检测、类风湿因子相关实验 | 常规检测 |
五、主要应用场景
1. 人IgG的Fc相关荧光检测（核心应用）
典型场景：
- Fc受体结合研究（流式细胞术检测FcγR结合）
- 免疫复合物检测
- 类风湿因子（RF）检测体系（避免轻链干扰）
- 人源化抗体药物检测
- 小鼠腹水中的人IgG检测（不交叉小鼠IgG）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞/组织切片固定、透化 |
| 2 | 封闭Fc受体（使用人IgG） |
| 3 | 加入人源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育（30分钟） |
| 7 | 洗涤、DAPI染核（可选） |
| 8 | 荧光显微镜观察或流式细胞仪检测 |
2. 流式细胞术（细胞表面Fc受体检测）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞悬液准备（活细胞） |
| 2 | 封闭Fc受体（使用人IgG或Fc阻断剂） |
| 3 | 加入待测人源抗体（与被测抗原结合） |
| 4 | 加入FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)（1:150-1500稀释） |
| 5 | 避光孵育30分钟 |
| 6 | 洗涤、重悬 |
| 7 | 流式细胞仪检测（FITC通道） |
3. 免疫荧光（IF）——细胞/组织染色
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片或细胞爬片固定、透化 |
| 2 | 封闭Fc受体（使用人IgG） |
| 3 | 加入人源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育（30-60分钟） |
| 7 | 洗涤、DAPI染核（可选） |
| 8 | 荧光显微镜观察（绿色荧光） |
4. 免疫组化（IHC）——荧光法
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片脱蜡、抗原修复 |
| 2 | 封闭Fc受体（使用人IgG） |
| 3 | 加入人源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)（1:500-2500稀释） |
| 6 | 避光孵育 |
| 7 | 洗涤、封片 |
| 8 | 荧光显微镜观察 |
六、实验操作要点
1. 流式细胞术方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 细胞计数，调整至1×10⁶-1×10⁷/mL | 每管100μL |
| 2 | 固定、透化（如需胞内染色） | 使用商业固定/透化试剂盒 |
| 3 | 封闭Fc受体 | 使用人IgG或商业Fc阻断剂 |
| 4 | 加入人源一抗 | 室温避光孵育30分钟 |
| 5 | 洗涤 | PBS+1%BSA，2-3次 |
| 6 | 加入FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠) | 1:150-1500稀释，避光30分钟 |
| 7 | 洗涤 | 2-3次 |
| 8 | 重悬于PBS或固定液 | 立即上机或4℃避光保存 |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IF | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IHC | 1:1000 | 1:500-1:2500 |
| ELISA（荧光法） | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
3. 对照设置（关键！验证特异性）
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 人IgG阳性对照 | 人IgG包被或人源一抗 | 验证检测体系正常工作 |
| 小鼠IgG阴性对照 | 小鼠IgG包被或小鼠源一抗 | 验证不交叉—应无显著荧光信号 |
| 人IgM/IgA对照 | 人IgM/IgA包被 | 验证Fc特异性—应无显著信号 |
| 未染色对照 | 不加任何抗体 | 评估细胞自发荧光 |
4. 重要操作提示
- 避光操作：FITC是光敏染料，整个实验过程（特别是加入FITC-二抗后）应尽量避光，防止荧光淬灭。
- Fc特异性：本产品识别的是人IgG的Fc片段，不识别Fab片段，不识别IgM、IgA、IgE。
- 不交叉小鼠IgG：适用于小鼠-人双物种实验体系（如小鼠腹水中的人抗体检测）。
- Fc受体封闭：流式细胞术和IF实验中，务必使用人IgG或商业Fc受体阻断剂封闭Fc受体，降低非特异性结合。
- 固定剂选择：如需固定，使用含低浓度甲醛的固定液（如1-2% PFA），避免使用含甲醇的固定剂（可能影响荧光）。
- 荧光检测：使用流式细胞仪的FITC通道（FL1）或荧光显微镜的FITC滤光片组（激发470-495nm，发射515-530nm）。
- 请使用正确的稀释液，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果。
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 避光要求 | 务必避光，防止荧光淬灭 |
| 有效期 | 以产品标签为准；有效期过后很长一段时间仍可使用，但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免污染和失效 |
八、常见问题
Q1：FITC-山羊抗人IgG(Fc特异性)(不交叉小鼠)的主要用途是什么？
A1：主要用于流式细胞术和免疫荧光（IF） 实验中人IgG的Fc特异性检测。特别适用于Fc受体研究、免疫复合物检测、类风湿因子检测等需要避免轻链干扰的实验，以及小鼠-人双物种实验体系。
Q2：Fc特异性与H+L特异性有什么区别？
A2：
| 特性 | Fc特异性 | H+L特异性 |
|---|---|---|
| 识别区域 | 仅Fc片段 | 重链+轻链 |
| 识别Fab片段 | 否 | 是 |
| 识别IgM/IgA | 否 | 可能 |
| 背景水平 | 更低 | 中等 |
| 适用场景 | Fc受体研究、RF检测 | 常规检测 |
Q3：“不交叉小鼠IgG”是什么意思？
A3：指本产品经过小鼠IgG亲和吸附柱处理，去除了与小鼠IgG交叉反应的抗体。验证方法：以小鼠IgG包被ELISA板或使用小鼠源一抗进行IF/流式检测，应无显著荧光信号。
Q4：FITC的激发和发射波长是多少？
A4：
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 最大激发波长 | 约490nm |
| 最大发射波长 | 约520nm |
| 流式通道 | FITC通道（通常为FL1） |
| 荧光颜色 | 绿色 |
Q5：如何避免FITC荧光淬灭？
A5：
- 实验全程避光（使用铝箔包裹试管/避光盒）
- 观察时尽量减少激发光照射时间
- 使用抗荧光淬灭封片剂（IF/IHC）
- 尽快上机检测（流式）
Q6：如何确定最佳稀释度？
A6：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:150开始倍比稀释至1:3000，选择信噪比最高的稀释度。
Q7：产品如何保存？
A7：请存放于**-20℃，严格避光**，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品为FITC标记的山羊抗人IgG(Fc特异性)抗体，经交叉吸附处理，不识别小鼠IgG，已通过多家客户验证，灵敏度高、特异性好、背景低，特别适用于流式细胞术和免疫荧光（IF） 实验，是Fc受体研究与自身抗体检测的高特异性核心工具。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）