FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)：高特异性小鼠IgG荧光检测与双物种实验的核心工具
在生物医药研发和基础科研领域，小鼠是最常用的实验动物和抗体生产宿主。羊抗小鼠IgG是检测小鼠源抗体的经典二抗。然而，在涉及兔和小鼠双物种的实验体系中（如小鼠-兔杂交瘤筛选、兔腹水中的小鼠抗体检测、混合样本检测等），普通抗小鼠IgG二抗可能与兔IgG发生交叉反应，导致假阳性结果。本产品为经过交叉吸附处理的山羊抗小鼠IgG(H+L)，不识别兔IgG，是多物种实验体系中高特异性小鼠IgG荧光检测的理想选择。FITC标记进一步结合了绿色荧光检测系统，适用于流式细胞术和免疫荧光等实验。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)（FITC标记） |
| 宿主来源 | 山羊 |
| 特异性 | 识别小鼠IgG的重链和轻链（H+L），经交叉吸附处理，不识别兔IgG |
| 标记物 | FITC（异硫氰酸荧光素，绿色荧光） |
| 激发/发射波长 | Ex: 490nm / Em: 520nm（典型值） |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%GSA、N防腐剂（CMIT/MIT/THYMOL） |
| 保存条件 | -20℃避光保存（注意避光，防止荧光淬灭） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 流式细胞术/IF | 1:150-1500 |
| IHC | 1:500-2500 |
| ELISA | 可适用 |
| 识别范围 | 小鼠IgG重链和轻链（H+L） |
| 交叉反应 | 经吸附处理，不识别兔IgG |
| 荧光颜色 | 绿色（FITC） |
三、产品特点
-
高特异性——不交叉兔IgG
经过严格的交叉吸附处理，本产品不识别兔IgG，确保在兔-小鼠双物种实验体系中无假阳性信号。 -
FITC标记——绿色荧光检测
FITC是经典的绿色荧光染料，激发波长约490nm，发射波长约520nm，与流式细胞仪的FITC通道（通常为FL1通道）完美匹配。 -
H+L特异性——双重识别
识别IgG的重链和轻链，灵敏度更高，特别适用于流式细胞术和免疫荧光。 -
多平台兼容
特别适用于流式细胞术和免疫荧光（IF），也可用于IHC和ELISA。 -
山羊源优势：种属差异大，非特异性交叉反应极低，背景干净。
四、FITC荧光标记与交叉吸附的特点
| 特性 | 说明 |
|---|---|
| 荧光颜色 | 绿色 |
| 激发波长 | 约490nm（氩离子激光器488nm常用） |
| 发射波长 | 约520nm |
| 流式通道 | FITC通道（通常为FL1） |
| 交叉吸附 | 经兔IgG亲和吸附柱处理，去除与兔IgG交叉反应的抗体 |
| 适用场景 | 兔-小鼠双物种实验体系 |
五、主要应用场景
1. 兔-小鼠双物种体系中的小鼠IgG荧光检测（核心应用）
典型场景：
- 兔腹水中表达并纯化的小鼠抗体检测
- 小鼠-兔杂交瘤细胞筛选
- 混合血清样本中特异性检测小鼠IgG（同时存在兔IgG）
- 兔组织/细胞上检测小鼠一抗（IHC/IF）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞/组织切片固定、透化 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育（30分钟） |
| 7 | 洗涤、DAPI染核（可选） |
| 8 | 荧光显微镜观察或流式细胞仪检测 |
2. 流式细胞术
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 制备细胞单细胞悬液 |
| 2 | 固定、透化（如需胞内染色） |
| 3 | 封闭Fc受体 |
| 4 | 加入小鼠源一抗 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育30分钟 |
| 7 | 洗涤、重悬 |
| 8 | 流式细胞仪检测（FITC通道） |
3. 免疫荧光（IF）——细胞/组织染色
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片或细胞爬片固定、透化 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)（1:150-1500稀释） |
| 6 | 避光孵育（30-60分钟） |
| 7 | 洗涤、DAPI染核（可选） |
| 8 | 荧光显微镜观察（绿色荧光） |
4. 免疫组化（IHC）——荧光法
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 组织切片脱蜡、抗原修复 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入小鼠源一抗 |
| 4 | 洗涤 |
| 5 | 加入FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)（1:500-2500稀释） |
| 6 | 避光孵育 |
| 7 | 洗涤、封片 |
| 8 | 荧光显微镜观察 |
六、实验操作要点
1. 流式细胞术方案（使用本产品）
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 细胞计数，调整至1×10⁶-1×10⁷/mL | 每管100μL |
| 2 | 固定、透化（如需胞内染色） | 使用商业固定/透化试剂盒 |
| 3 | 封闭Fc受体 | 使用小鼠IgG或商业封闭剂 |
| 4 | 加入小鼠源一抗 | 室温避光孵育30分钟 |
| 5 | 洗涤 | PBS+1%BSA，2-3次 |
| 6 | 加入FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG) | 1:150-1500稀释，避光30分钟 |
| 7 | 洗涤 | 2-3次 |
| 8 | 重悬于PBS或固定液 | 立即上机或4℃避光保存 |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IF | 1:500 | 1:150-1:1500 |
| IHC | 1:1000 | 1:500-1:2500 |
| ELISA（荧光法） | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
3. 对照设置（关键！验证交叉吸附效果）
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 小鼠IgG阳性对照 | 小鼠IgG包被或小鼠源一抗 | 验证检测体系正常工作 |
| 兔IgG阴性对照 | 兔IgG包被或兔源一抗 | 验证不交叉—应无显著荧光信号 |
| 未染色对照 | 不加任何抗体 | 评估细胞自发荧光 |
| 二抗对照 | 不加一抗，只加FITC-二抗 | 评估二抗非特异性结合 |
重要：实验时应同时设置兔IgG阴性对照，确认无交叉反应。
4. 重要操作提示
- 避光操作：FITC是光敏染料，整个实验过程（特别是加入FITC-二抗后）应尽量避光，防止荧光淬灭。
- 不交叉兔IgG：本产品最大的特点是不识别兔IgG，适用于兔-小鼠双物种实验体系。
- H+L特异性：抗体识别IgG的重链和轻链，灵敏度更高，适用于流式和IF。
- Fc受体封闭：流式细胞术和IF实验中，建议使用小鼠IgG或商业Fc受体封闭剂封闭Fc受体，降低非特异性结合。
- 固定剂选择：如需固定，使用含低浓度甲醛的固定液（如1-2% PFA），避免使用含甲醇的固定剂（可能影响荧光）。
- 荧光检测：使用流式细胞仪的FITC通道（FL1）或荧光显微镜的FITC滤光片组（激发470-495nm，发射515-530nm）。
- 请使用正确的稀释液，没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验，否则可能得到错误结果。
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议适当分装后使用 |
| 避光要求 | 务必避光，防止荧光淬灭 |
| 有效期 | 以产品标签为准；有效期过后很长一段时间仍可使用，但仍建议在有效期内使用 |
| 环境要求 | 请不要在脏乱和强光环境中取用，以免污染和失效 |
八、常见问题
Q1：FITC-山羊抗小鼠IgG(H+L)(不交叉兔IgG)的主要用途是什么？
A1：主要用于流式细胞术和免疫荧光（IF） 实验中对小鼠IgG的特异性荧光检测，特别适用于兔和小鼠共存的实验体系（如兔腹水中的小鼠抗体检测、混合样本检测），避免兔IgG的交叉反应干扰。
Q2：“不交叉兔IgG”是什么意思？如何验证？
A2：指本产品经过兔IgG亲和吸附柱处理，去除了与兔IgG交叉反应的抗体。验证方法：以兔IgG包被ELISA板或使用兔源一抗进行IF/流式检测，应无显著荧光信号。
Q3：什么情况下需要使用本产品？
A3：
| 实验场景 | 推荐产品 |
|---|---|
| 单纯小鼠样本（无兔IgG） | 普通抗小鼠IgG即可 |
| 兔与小鼠混合样本 | 本产品（不交叉） |
| 兔腹水中检测小鼠抗体 | 本产品（不交叉） |
| 兔组织上检测小鼠一抗（IHC/IF） | 本产品（不交叉） |
Q4：FITC的激发和发射波长是多少？
A4：
| 参数 | 数值 |
|---|---|
| 最大激发波长 | 约490nm |
| 最大发射波长 | 约520nm |
| 流式通道 | FITC通道（通常为FL1） |
| 荧光颜色 | 绿色 |
Q5：如何避免FITC荧光淬灭？
A5：
- 实验全程避光（使用铝箔包裹试管/避光盒）
- 观察时尽量减少激发光照射时间
- 使用抗荧光淬灭封片剂（IF/IHC）
- 尽快上机检测（流式）
Q6：如何确定最佳稀释度？
A6：建议通过预实验进行滴定：将抗体从1:150开始倍比稀释至1:3000，选择信噪比最高的稀释度。
Q7：产品如何保存？
A7：请存放于**-20℃，严格避光**，避免反复冻融，建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品为FITC标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体，经交叉吸附处理，不识别兔IgG，已通过多家客户验证，灵敏度高、特异性好、背景低，特别适用于兔-小鼠双物种实验体系的流式细胞术和免疫荧光检测。如需详细技术参数或样品测试，请与我们联系。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）