在临床免疫检测和感染性疾病诊断领域,人IgM是早期免疫应答的标志——它的出现标志着近期感染、疫苗早期应答或免疫激活。在病毒性肝炎、EB病毒、巨细胞病毒、梅毒、COVID-19等多种传染病的急性期血清学诊断中,IgM的精准检测是鉴别急性感染与既往感染的关键。μ链特异性抗体仅识别IgM的重链(μ链),不与其他免疫球蛋白(IgG、IgA、IgE)发生交叉反应,确保检测结果的特异性。生物素标记的小鼠抗人IgM(μ链特异性)将生物素-亲和素信号放大系统与高特异性抗体相结合,可显著提高检测灵敏度。
一、产品概述
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项目
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参数
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产品名称
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BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(生物素标记)
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宿主来源
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小鼠
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特异性
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识别人IgM的μ重链,不识别IgG、IgA、IgE
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标记物
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生物素(Biotin)
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浓度
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以抗体计1mg/mL左右
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缓冲液成分
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50%甘油、0.01M PBS、0.5%BSA、N防腐剂(CMIT/MIT/THYMOL)
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保存条件
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-20℃(避光)
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有效期
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以产品标签为准
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二、核心性能
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性能指标
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参数
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流式细胞术/IF/IP
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1:200-2000
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IHC
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1:500-2500
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ELISA/Western Blot
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1:2000-20000
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识别范围
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人IgM μ重链
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交叉反应
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μ链特异性,不识别IgG、IgA、IgE
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信号放大系统
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配合HRP/荧光标记的链霉亲和素使用
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三、产品特点
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μ链特异性——精准识别IgM
特异性针对人IgM的μ重链,不与人IgG、IgA、IgE等其他免疫球蛋白发生交叉反应,确保检测结果的准确性和特异性。
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生物素标记——信号放大能力强
生物素-亲和素系统是目前最灵敏的信号放大系统之一,可将信号放大数十倍至上百倍。
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高稀释倍数
ELISA/WB推荐稀释度1:2000-20000,经济耐用。
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多平台兼容
适用于ELISA、Western Blot、流式细胞术、免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫沉淀(IP)等多种检测平台。
四、μ链特异性的重要性与生物素标记的优势
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特性
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μ链特异性抗体
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普通抗人IgM抗体
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识别区域
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仅IgM μ重链
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可能同时识别IgG(重链交叉)
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与IgG/IgA/IgE交叉反应
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无
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可能存在
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检测准确性
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高
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可能假阳性
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适用场景
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急性感染鉴别诊断
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不推荐用于IgM特异性检测
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生物素标记优势
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说明
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信号放大
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一个生物素化抗体可结合多个链霉亲和素-HRP/荧光,实现信号级联放大
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灵敏度提升
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比直接HRP标记抗体灵敏度提高5-20倍
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灵活性
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同一生物素化抗体可配合不同检测系统(HRP、荧光、胶体金)
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五、人IgM检测的临床与科研意义
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应用领域
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检测意义
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甲肝/戊肝病毒感染
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IgM阳性提示急性感染
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EB病毒感染
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VCA-IgM阳性提示近期原发感染
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巨细胞病毒(CMV)感染
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IgM阳性提示近期感染(尤其孕期筛查)
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梅毒螺旋体感染
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特异性IgM检测,辅助判断活动性感染
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COVID-19
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病毒特异性IgM阳性提示近期感染
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麻疹/风疹/腮腺炎
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IgM阳性用于急性感染诊断
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自身免疫病
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检测类风湿因子(RF,一种抗IgG的IgM)
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疫苗免疫评价
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免疫后IgM出现,反映疫苗诱导的早期体液应答
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六、主要应用场景
1. 人血清中特异性IgM抗体的ELISA检测(核心应用)
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步骤
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操作
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1
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包被特异性抗原(如病毒抗原、细菌抗原)
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2
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封闭
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3
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加入不同稀释度的人血清
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4
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(1:2000-20000稀释)
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5
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加入HRP-链霉亲和素
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6
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加TMB显色
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2. IgM捕获ELISA法(M-捕获法,推荐用于高准确性检测)
由于血清中高浓度IgG可能干扰IgM检测(竞争结合抗原),捕获ELISA法是金标准。
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步骤
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操作
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1
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包被抗人IgM(μ链特异性)捕获抗体
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2
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封闭
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3
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加入人血清样品(捕获IgM)
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4
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加入特异性抗原
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5
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加入酶标记的抗抗原检测抗体
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6
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加TMB显色
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3. 血清总IgM的ELISA定量检测
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步骤
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操作
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1
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包被抗人IgM捕获抗体(另一克隆)
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2
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封闭
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3
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加入人血清样品(适当稀释)
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4
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(1:2000-20000稀释)
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5
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加入HRP-链霉亲和素
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6
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加TMB显色
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参考正常值:成人血清总IgM正常范围约0.5-2.0 mg/mL。
4. 急性感染与既往感染的鉴别诊断
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检测结果
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判断
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IgM阳性、IgG阴性
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急性感染早期
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IgM阳性、IgG阳性
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急性感染期
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IgM阴性、IgG阳性
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既往感染或免疫后
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5. 类风湿因子(RF)检测
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步骤
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操作
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1
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包被人IgG(变性处理)
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2
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封闭
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3
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加入待测血清样品
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4
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(检测结合的RF,RF为结合人IgG的自身IgM抗体)
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5
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加TMB显色
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6. Western Blot检测
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步骤
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操作
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1
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将人IgM标准品进行SDS-PAGE电泳(非还原或还原)
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2
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转膜
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3
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封闭
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4
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(1:2000-20000稀释)
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5
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加入HRP-链霉亲和素
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6
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ECL化学发光检测
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预期条带:还原条件下μ重链约75kDa。
7. 流式细胞术(检测B细胞表面IgM)
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步骤
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操作
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1
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分离人外周血单个核细胞(PBMC)
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2
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封闭Fc受体
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3
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)(1:200-2000稀释)
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4
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加入荧光标记的链霉亲和素(如SA-FITC、SA-PE)
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5
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流式细胞仪检测IgM阳性B细胞
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七、实验操作要点
1. 间接ELISA方案(使用本产品)
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步骤
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操作
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说明
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1
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包被特异性抗原
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4℃过夜
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2
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封闭
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含BSA或脱脂奶粉
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3
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加入人血清样品
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室温孵育1-2小时
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4
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洗涤
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3-5次
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5
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加入BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)
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1:2000-20000稀释,室温1小时
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6
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洗涤
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3-5次
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7
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加入HRP-链霉亲和素
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按说明书稀释,室温30分钟
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8
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洗涤
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3-5次
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9
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加TMB显色
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15-20分钟
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10
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终止读数
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450nm
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2. IgM捕获ELISA方案(M-捕获法)
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步骤
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操作
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说明
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1
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包被抗人IgM(μ链特异性)捕获抗体
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4℃过夜
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2
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封闭
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含BSA
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3
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加入人血清样品(稀释1:100-1:1000)
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室温1-2小时(捕获IgM)
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4
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洗涤
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3-5次
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5
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加入生物素化抗原
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室温1小时
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6
|
洗涤
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3-5次
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7
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加入HRP-链霉亲和素
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室温30分钟
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8
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洗涤,显色
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3. 稀释度选择建议
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实验类型
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建议起始稀释度
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优化范围
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ELISA
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1:5000
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1:2000-1:20000
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流式细胞术
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1:500
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1:200-1:2000
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IHC
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1:1000
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1:500-1:2500
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IF
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1:500
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1:200-1:2000
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IP
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1:500
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1:200-1:2000
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4. 对照设置
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对照类型
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组成
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目的
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阳性对照
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已知IgM阳性人血清(急性感染期)
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验证检测体系
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阴性对照
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健康人阴性血清
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评估背景
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IgG/IgA/IgE交叉对照
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高浓度人IgG/IgA/IgE样品
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验证μ链特异性—应无显著信号
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二抗对照
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不加一抗,只加BIOTIN-二抗
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评估非特异性结合
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5. 重要操作提示
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本产品为μ链特异性,不识别IgG、IgA、IgE,确保IgM检测的特异性。
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人IgM为五聚体结构,分子量大(~900kDa),检测时需注意。
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在间接ELISA中,血清中高浓度的IgG可能竞争结合抗原,导致IgM假阴性。建议使用IgM捕获ELISA法(M-捕获法) 以获得更准确结果。
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本产品为生物素标记抗体,必须与链霉亲和素(SA)检测系统配合使用,不可直接显色。
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生物素-亲和素系统可显著放大信号,适用于低丰度IgM检测。
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某些组织(肝、肾)含内源性生物素,可能产生高背景,建议使用生物素封闭试剂盒。
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请使用正确的稀释液,没有酶免基础知识的人员不得利用本产品做任何实验,否则可能得到错误结果。
八、保存与使用注意事项
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项目
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说明
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保存条件
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-20℃避光保存
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分装建议
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避免反复冻融,建议适当分装后使用
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有效期
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以产品标签为准;有效期过后很长一段时间仍可使用,但仍建议在有效期内使用
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环境要求
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请不要在脏乱和强光环境中取用,以免污染和失效
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九、常见问题
Q1:BIOTIN-小鼠抗人IgM(μ链特异性)的主要用途是什么?
A1:主要用于ELISA、Western Blot、流式细胞术等实验中人IgM的特异性检测,特别适用于急性感染的早期诊断(如甲肝、戊肝、EBV、CMV、梅毒、COVID-19等),以及人B细胞表面IgM的检测和类风湿因子(RF)检测。
Q2:μ链特异性是什么意思?为什么重要?
A2:μ链特异性指抗体仅识别IgM的重链(μ链),不识别IgG、IgA、IgE等其他免疫球蛋白。这一特性确保IgM检测结果不受血清中高浓度IgG的干扰,避免假阳性,是急性感染鉴别诊断的关键。
Q3:间接ELISA与IgM捕获ELISA(M-捕获法)有什么区别?
A3:
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方法
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原理
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优点
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缺点
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间接ELISA
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抗原包被,直接加待检血清
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操作简单
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高浓度IgG可能竞争抗原,导致假阴性
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捕获ELISA
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抗IgM抗体包被,捕获血清中IgM
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去除IgG干扰,准确性高
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步骤略多,需要抗IgM捕获板
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推荐:临床样品检测推荐使用捕获ELISA法。
Q4:本产品可以用于类风湿因子(RF)检测吗?
A4:可以。RF主要成分为IgM型抗IgG Fc的自身抗体。通过包被人IgG(变性处理),再用本产品检测结合的IgM型RF,可用于RF的半定量检测。
Q5:如何确定最佳稀释度?
A5:建议通过预实验进行滴定:将抗体从1:500开始倍比稀释至1:40000,以已知IgM阳性血清为阳性对照,选择信噪比最高的稀释度。
Q6:产品如何保存?
A6:请存放于-20℃,避免反复冻融,建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品为生物素标记的小鼠抗人IgM(μ链特异性)抗体,已通过多家客户验证,灵敏度高、特异性好、背景低,适用于ELISA、Western Blot、流式细胞术等多种免疫检测实验,是急性感染早期诊断的核心工具。如需详细技术参数或样品测试,请与我们联系。
(注:本产品仅用于科学研究,不用于临床诊断。)