兔抗人IgG(H+L):人源样本检测的理想二抗选择
在人源样本的免疫学检测中,抗人IgG二抗是使用频率最高的检测工具之一。当您的实验体系需要与山羊源试剂配合使用时,兔源抗人IgG二抗便成为理想选择。
今天,我们以兔抗人IgG(H+L)为例,为您解析这类产品在人IgG检测中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | 兔抗人IgG(H+L) |
| 宿主 | 兔 |
| 特异性 | 识别人IgG的重链和轻链(H+L) |
| 蛋白浓度 | 约5mg/mL(OD280=7) |
| 产品纯度 | ≥90% |
| 规格 | 1mg/支 |
| 保存条件 | -20℃ |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| ELISA推荐稀释度 | 1:20000-100000 |
| WB推荐稀释度 | 1:20000-50000 |
| ICC/IF推荐稀释度 | 1:200-2000 |
| Flow Cyt推荐稀释度 | 1:1000-4000 |
| 起始工作浓度 | 1:5000-1:10000(ELISA) |
三、产品特点
1. H+L全长识别——信号更强
本品为H+L型,同时识别人IgG的重链和轻链,可结合的位点更多,信号强度更高,尤其适合低丰度靶标检测。
2. 兔源宿主——避免与山羊源试剂交叉
兔源二抗与山羊源一抗/检测抗体无交叉反应,特别适合与山羊源试剂联用的多色标记实验。
3. 高纯度——背景更干净
- 亲和纯化,抗体纯度≥90%
- 经验证不与BSA、酪蛋白结合,可放心使用含BSA的封闭体系
4. 高稀释倍数——经济耐用
ELISA推荐稀释度1:20000-100000,使用得当可显著降低单次实验成本。
四、兔源 vs 山羊源:如何选择?
| 对比维度 | 兔抗人IgG | 山羊抗人IgG |
|---|---|---|
| 与山羊源试剂交叉 | 无交叉 | 可能交叉 |
| 与兔源试剂交叉 | 可能交叉 | 无交叉 |
| 多色标记兼容性 | 与山羊源、大鼠源兼容 | 与兔源、大鼠源兼容 |
| 推荐应用 | 与山羊源一抗联用 | 与兔源一抗联用 |
选择建议:若实验体系中已使用山羊源一抗,推荐选择兔源二抗避免交叉。
五、主要应用场景
| 应用平台 | 推荐稀释度 | 说明 |
|---|---|---|
| ELISA | 1:20000-100000 | 检测人血清特异性抗体 |
| Western Blot | 1:20000-50000 | 检测人IgG条带 |
| ICC/IF | 1:200-2000 | 组织切片中IgG定位 |
| 流式细胞术 | 1:1000-4000 | 检测细胞表面IgG |
| 多色标记 | 根据实验优化 | 与山羊源试剂联用 |
六、实验操作要点
1. 稀释液选择
| 推荐稀释液 | 说明 |
|---|---|
| 含0.2% BSA和0.05%吐温-20的0.01M PBS(pH 7.0) | 首选 |
| 其它正确稀释液 | 可替代 |
2. 稀释度优化
建议通过预实验确定最佳稀释度:
| 初筛稀释度 | 优化范围 |
|---|---|
| 1:5000(ELISA) | 1:2000-1:100000 |
3. 对照设置
| 对照类型 | 组成 | 目的 |
|---|---|---|
| 阳性对照 | 人IgG标准品或阳性血清 | 验证检测体系 |
| 阴性对照 | 健康人血清 | 评估背景 |
| 二抗对照 | 不加一抗 | 评估二抗特异性 |
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃保存,避光 |
| 分装建议 | 避免反复冻融,建议分装保存 |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
八、常见问题
Q1:H+L型二抗与Fc特异性二抗有什么区别?
A1:H+L型识别IgG的重链和轻链,信号更强;Fc特异性仅识别Fc段。常规ELISA/WB推荐H+L型。存在游离轻链的样本建议选择Fc特异性。
Q2:本产品能否用于检测人IgG亚类?
A2:本品识别所有IgG亚类(IgG1-4),适用于总IgG检测。如需检测特定亚类,请选择亚类特异性二抗。
Q3:在Western Blot中还原和非还原条件有什么区别?
A3:还原条件下(DTT/β-巯基乙醇),重链(~50kDa)和轻链(~25kDa)分离,出现两条带;非还原条件下识别完整IgG(~150kDa)。
Q4:如何确定最佳稀释度?
A4:建议通过预实验进行滴定:将二抗从1:5000开始倍比稀释至1:160000,选择信噪比最高的稀释度作为工作浓度。
Q5:抗体如何保存?
A5:请存放于**-20℃**保存,避免反复冻融,建议分装保存。有效期以产品标签为准。
本产品已通过多家客户验证,灵敏度高、特异性好,适用于ELISA、Western Blot、IHC、流式细胞术等免疫检测实验。如需详细技术参数或样品测试,请与我们联系。
(注:本产品仅用于科学研究,不用于临床诊断。)
