鼠源抗牛奶酪蛋白配对单克隆抗体的制备与应用研究

鼠源抗牛奶酪蛋白配对单克隆抗体的制备与应用研究

引言

牛奶酪蛋白作为乳制品中的主要蛋白质成分，其检测与定量分析在食品工业、质量监控及过敏原研究领域具有至关重要的意义。传统的多克隆抗体因其特异性有限和批次间差异性，难以满足高精度检测的需求。单克隆抗体技术凭借其高度特异性和均一性的优势，为建立灵敏、特异的免疫分析方法提供了理想工具。其中，能够识别同一抗原不同表位的配对单克隆抗体，是构建夹心酶联免疫吸附实验等检测方法的核心试剂。因此，制备高亲和力与高特异性的鼠源抗牛奶酪蛋白配对单克隆抗体，并探索其应用价值，成为一项具有明确应用前景的研究课题。

主体

制备鼠源抗牛奶酪蛋白单克隆抗体的首要环节在于抗原的纯化与动物免疫。通常采用商业纯化的牛奶酪蛋白或通过色谱技术从脱脂牛奶中进一步纯化获得免疫原。随后，通过腹腔或皮下注射方式免疫BALB/c小鼠，并辅以适宜的佐剂以增强免疫应答。经过数次免疫后，通过尾静脉采血测定血清效价，当效价达到平台期时，即可进行细胞融合。此项流程的严谨操作是获得高质量杂交瘤细胞株的基础。

细胞融合与杂交瘤筛选是单克隆抗体制备过程中的核心技术步骤。取高效价免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在聚乙二醇作用下进行融合，随后将融合细胞转移至含有HAT选择性培养基的96孔板中进行培养。在此环境下，未融合的脾细胞自然凋亡，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶而无法存活，唯有杂交瘤细胞能够持续增殖。待细胞克隆形成后，需使用酪蛋白作为包被抗原，通过间接ELISA法对上清液进行初步筛选，以鉴定分泌目标抗体的阳性孔。

阳性杂交瘤细胞的克隆化与抗体配对能力鉴定是获得配对单克隆抗体的关键。对初步筛选出的阳性孔，需立即采用有限稀释法进行至少两至三轮的亚克隆，确保每个扩增的细胞群均源于单个细胞，从而保证抗体的单克隆性。随后，对大量分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株进行扩大培养，并收集上清液或诱导腹