BIOTIN-小鼠抗His标签抗体：蛋白互作与纯化检测中的信号放大利器
在蛋白表达纯化、免疫共沉淀及蛋白互作研究中，His标签（通常为6×His）因其分子量小、免疫原性低、不影响蛋白天然构象而成为应用最广泛的标签之一。然而，在检测低丰度His标签融合蛋白时，灵敏度的提升至关重要。生物素（Biotin）标记的小鼠抗His标签抗体，配合生物素-亲和素放大系统，为实现高灵敏度、高特异性的His标签蛋白检测提供了核心工具。
今天，我们以BIOTIN-小鼠抗His tag为例，为您解析其在蛋白互作与纯化检测中的应用价值。
一、产品概述
| 项目 | 参数 |
|---|---|
| 产品名称 | BIOTIN-小鼠抗His tag |
| 特异性 | 识别His标签（6×His等） |
| 标记物 | 生物素（Biotin） |
| 浓度 | 以抗体计1mg/mL左右 |
| 缓冲液成分 | 50%甘油、0.01M PBS、0.5%BSA、N防腐剂（CMIT/MIT/THYMOL） |
| 保存条件 | -20℃（避光） |
| 有效期 | 以产品标签为准 |
二、核心性能与稀释度建议
| 性能指标 | 参数 |
|---|---|
| 流式细胞术/IF/IP | 1:200-2000 |
| 免疫组化（IHC） | 1:500-2500 |
| ELISA/Western Blot | 1:2000-20000 |
| 信号放大系统 | 配合HRP/荧光标记的链霉亲和素（SA）使用 |
三、产品特点
-
His标签特异性——精准识别
特异性针对多聚组氨酸标签（His tag），适用于检测原核/真核表达的各种His标签融合蛋白。 -
生物素标记——强大的信号放大能力
生物素-亲和素系统是目前最灵敏的信号放大系统之一，可将检测信号放大数十倍至上百倍。 -
高稀释倍数——经济耐用
在WB/ELISA中推荐稀释度高达1:20000，使用成本低。 -
多平台兼容
广泛适用于Western Blot、ELISA、流式细胞术、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、免疫沉淀（IP）等多种检测平台。
四、生物素标记的优势
| 特性 | 说明 |
|---|---|
| 信号放大 | 一个生物素化抗体可结合多个酶标/荧光标记的链霉亲和素，实现信号级联放大 |
| 灵敏度提升 | 比直接HRP标记抗体灵敏度提高5-20倍，尤其适合低丰度蛋白检测 |
| 灵活性 | 同一生物素化抗体可配合不同的检测系统（HRP、荧光、胶体金） |
五、主要应用场景
1. Western Blot（WB）中的高灵敏度检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | SDS-PAGE电泳、转膜 |
| 2 | 封闭（推荐使用无His标签的脱脂奶粉或BSA） |
| 3 | 加入BIOTIN-小鼠抗His tag（1:2000-20000稀释） |
| 4 | 加入HRP-链霉亲和素 |
| 5 | ECL化学发光检测 |
2. ELISA中的定量检测
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 包被抗His标签捕获抗体或直接包被His融合蛋白 |
| 2 | 封闭 |
| 3 | 加入BIOTIN-小鼠抗His tag（1:2000-20000稀释） |
| 4 | 加入HRP-链霉亲和素 |
| 5 | 加TMB显色，450nm读数 |
3. 免疫沉淀（IP）/免疫共沉淀（Co-IP）
| 步骤 | 操作 |
|---|---|
| 1 | 细胞裂解液与抗His标签抗体孵育 |
| 2 | 加入Protein A/G琼脂糖珠 |
| 3 | 洗涤后，WB检测使用BIOTIN-小鼠抗His tag + SA-HRP |
优势：生物素放大系统可显著提高IP-WB中低丰度互作蛋白的检出率。
六、实验操作要点
1. Western Blot标准方案
| 步骤 | 操作 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 转膜后封闭 | 室温1小时 |
| 2 | 加入BIOTIN-抗His tag | 1:2000-20000稀释，4℃过夜或室温2小时 |
| 3 | 洗涤 | TBST洗涤3次，每次10分钟 |
| 4 | 加入HRP-链霉亲和素 | 按说明书稀释（通常1:1000-5000），室温1小时 |
| 5 | 洗涤 | TBST洗涤3次 |
| 6 | ECL显色 | 化学发光成像 |
2. 稀释度选择建议
| 实验类型 | 建议起始稀释度 | 优化范围 |
|---|---|---|
| ELISA/WB | 1:5000 | 1:2000-1:20000 |
| 流式细胞术 | 1:500 | 1:200-1:2000 |
| IHC | 1:1000 | 1:500-1:2500 |
| IF/IP | 1:500 | 1:200-1:2000 |
3. 重要操作提示
- 必须配合链霉亲和素（SA）检测系统使用：本产品为生物素标记，不可直接显色，必须使用HRP或荧光标记的链霉亲和素进行检测。
- 封闭液选择：使用无His标签的脱脂奶粉或BSA，避免封闭剂与抗体非特异性结合。
- 内源性生物素干扰：某些组织（肝、肾）含内源性生物素，可能产生高背景，建议使用生物素封闭试剂盒。
- 低温保存：含50%甘油，-20℃不结冰，可直接取用，但应避免反复冻融。
- 安全操作：防腐剂含CMIT/MIT，对部分人群可能致敏，建议戴手套操作。
七、保存与使用注意事项
| 项目 | 说明 |
|---|---|
| 保存条件 | -20℃避光保存，含甘油不结冰 |
| 分装建议 | 避免反复冻融，建议按单次用量分装 |
| 有效期 | 以产品标签为准，过期后不推荐使用 |
| 用途限制 | 仅用于科研，不用于诊断 |
八、常见问题（FAQ）
Q1：本产品可以用于Western Blot吗？
A1：可以。推荐稀释度1:2000-1:20000，需配合HRP-链霉亲和素和ECL显色系统使用，灵敏度优于直接HRP标记的二抗。
Q2：能用于流式细胞术（Flow Cytometry）吗？
A2：可以。推荐稀释度1:200-1:2000，需配合荧光标记的链霉亲和素（如SA-FITC、SA-PE）进行检测。
Q3：为什么抗体里含有甘油？
A3：甘油作为抗冻剂，防止抗体在-20℃储存时结冰，避免反复冻融对蛋白结构造成损伤。
Q4：防腐剂会影响我的细胞实验吗？
A4：防腐剂（CMIT/MIT/Thymol）对细胞有一定毒性。本产品不建议直接用于活细胞染色实验。如用于细胞实验，建议通过透析或脱盐柱去除防腐剂。
Q5：如何确定最佳稀释度？
A5：建议通过预实验进行梯度稀释，选择信噪比最高、背景最低的稀释度作为工作浓度。
总结： BIOTIN-小鼠抗His tag是一款灵敏度高、特异性好、应用广泛的生物素标记抗体。它通过生物素-亲和素信号放大系统，显著提升了Western Blot、ELISA、IHC、Flow-Cyt等实验中对低丰度His标签融合蛋白的检测能力，是蛋白表达纯化与蛋白互作研究中的得力工具。
（注：本产品仅用于科学研究，不用于临床诊断。）