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猪瘟蛋白(CSFV)荧光实验步骤

发布时间:2016-07-12 点击数:2331
  1.st细胞铺96孔板一个。(用无血清培养基稀释病毒)
  2.(一)病毒过滤无菌后,将三株单抗6d6,12f3,14e6,分别稀释1k倍,2k倍,2k倍,(可以先将抗体稀释十倍即10ul抗体加90ul培养基;再将10ul加入2ml猪瘟病毒中),共四个样,(原毒,原毒加6d6,原毒加12f3,原毒加14e6)。
(二)病毒稀释十倍后,按照上述步骤将抗体同样分别稀释,共四个样,混匀待用。(原毒稀释10倍,原毒稀释10倍加6d6,原毒10倍加12f3,原毒10倍加14e6)
   3.将贴壁后的96孔上清弃掉,加入上面8个样30ul/孔,各四个重复,吸附1h。
   4.补液50ul/孔。2%st培养基。
   5.96h一收并补液100ul/ 孔。
   6.144h二收。1 。pbs洗三次后弃掉pbs,拍干;
2.  加上冷乙醇固定20分钟(加完放-20摄氏度20分钟),弃掉上清,不用拍板;
3. pbs洗三次,弃上清,不用拍板,吸干水分;
4. 加入一抗37度半小时,pbs洗三次,吸干水分;
5. 加入二抗37度半小时,pbs洗4 次,观察显微镜。
6.注意事项:pbs洗要温柔,加入从同一个位点; 做不接毒的空白细胞的对照。
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