杂交瘤细胞培养有关注意事项

细胞株运输方式：常温3天

赠送： 5瓶无需饲养层的扩大培养基（冷藏运输）（民海类胎牛血清）
扩大培养基保存： -20度，内含生长因子。
扩大培养基使用：使用前先用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里化开并回温至水温的温度 （20-25度），化开后更换水，回温时间10-20分钟即可。

细胞冻存： 一个24孔冻存2支细胞，200微升/支 ；
冻存液配方：20%DM胎牛：DMSO=9:1

关于腹水制备： 生长良好的2个24孔 细胞数总量在60W-90W，正好可以打一只小鼠；生长良好的1个6孔 细胞数总量在60W-90W，正好可以打一只小鼠 。一只小鼠可以打50-120W个细胞，根据想要的效价确定细胞数量，一般60W-120W的细胞做出来的腹水效价在10-60W.

注意事项：
1. 收到细胞后先将其扩到1-2个24孔中，5%二氧化碳37度培养箱，静止培养过夜，待细胞长至80-90%满时，即可扩大培养，建议首选饲养细胞层，饲养细胞预铺2-4天，其次用扩大培养基1扩2培养。

2. 融化培养基时，应使用干净的自来水或者纯净水在干净的容器里，容器里水面高度务必小于等于瓶内的液面高度，化开期间不要摇晃瓶身，待其完全化开后，立即更换水温（20-25度）的水，这时的水面可以高于瓶内的液面高度，回温时间10-20分钟即可立即使用。

3.胎牛使用 ：固定品牌（杭州四季青胎牛或者民海类胎牛血清或者GIBCO进口胎牛血清）17-20%浓度使用DMEM培养基。各血清之间不可互换，可以先半换，根据情况再全换。

4. 细胞生长： 细胞扩大时必须等到对数生长期，不要提前或长过延后，即80-90%满时，即可扩大培养，建议用扩大培养基1扩2培养；如果使用饲养层细胞，不可以用扩大培养基，需要用17-20%浓度的DMEM普通培养基，HT或者无HT均可，无HT优先。